2009年考博生物化學(xué)與分子生物學(xué)核心九:蛋白質(zhì)的分離與純化
蛋白質(zhì)的分離與純化
1.鹽析與有機(jī)溶劑沉淀:在蛋白質(zhì)溶液中加入大量中性鹽,以破壞蛋白質(zhì)的膠體性質(zhì),使蛋白質(zhì)從溶液中沉淀析出,稱為鹽析。常用的中性鹽有:硫酸銨、氯化鈉、硫酸鈉等。鹽析時(shí),溶液的pH在蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)處效果最好。凡能與水以任意比例混合的有機(jī)溶劑,如乙醇、甲醇、丙酮等,均可引起蛋白質(zhì)沉淀。??
2.電泳:蛋白質(zhì)分子在高于或低于其pI的溶液中帶凈的負(fù)或正電荷,因此在電場(chǎng)中可以移動(dòng)。電泳遷移率的大小主要取決于蛋白質(zhì)分子所帶電荷量以及分子大小。??
3.透析:利用透析袋膜的超濾性質(zhì),可將大分子物質(zhì)與小分子物質(zhì)分離開。??
4.層析:利用混合物中各組分理化性質(zhì)的差異,在相互接觸的兩相(固定相與流動(dòng)相)之間的分布不同而進(jìn)行分離。主要有離子交換層析,凝膠層析,吸附層析及親和層析等,其中凝膠層析可用于測(cè)定蛋白質(zhì)的分子量。??
5.超速離心:利用物質(zhì)密度的不同,經(jīng)超速離心后,分布于不同的液層而分離。超速離心也可用來測(cè)定蛋白質(zhì)的分子量,蛋白質(zhì)的分子量與其沉降系數(shù)S成正比。
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